2020/4/13 15:32:00

培养基是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素,用于各种微生物培养和鉴定。

一般基础培养基中含有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸膏、氯化钠、琼脂等基本营养万分。

一些选择、鉴定培养基根据用途不同,则需加入抑菌剂、指示剂、血液、糖等试剂,以利于需要菌的生长与鉴别。

一些需要使细菌大量生长、繁殖的培养基,主要成分多为氨基酸、核苷酸、无机盐、生长因子等。

琼脂:是由石花菜或江篱 (属红藻) 中提取的一种藻胶,是由琼脂糖和琼胶质组成的长链多糖化合物。优点在于不能被细菌分解利用,在细菌培养的温度下凝胶强度稳定。

蛋白胨:为动物蛋白经酶消化后产物,能为微生物提供 C 源、N 源、生长因子等营养物质。
胰酪蛋白胨:是一种优质蛋白胨,亦称胰酶消化酪蛋白胨或胰蛋白胨。系采用酪蛋白经胰酶消化后,浓缩干燥而成。可配制各种微生物培养基,用于细菌的培养、分离、增殖、鉴定,以及无菌试验培养基、厌氧菌培养基等细菌生化特性试验用培养基的配置。


牛肉浸膏:是新鲜牛肉经剔除脂肪,消化过滤浓缩得到的一种营养物质,含有肌酸、肌酸酐、多肽类、氨基酸、核苷酸、有机酸、矿物质及维生素的水溶性物质。主要作用是为了补充蛋白胨以及其他氮源的营养不足。

酵母粉:富含 B 族维生素、有机氮以及碳水化合物等营养物质。

胆盐:是胆酸钠盐,是从动物的胆汁中提取的一种混合物,含胆酸、结合胆酸以及胆汁醇等,胆盐用在培养基中是作为选择性抑制剂,主要抑制革兰氏阳性菌的生长。

以上是简单介绍了培养基,在实际应用过程中,我们可以选择自己配制培养基也可以选择购买商业化的培养基。

正确制备培养基时微生物检验的最基础步骤之一。为保证培养基质量的稳定可靠,各配方组分应准确称量,并要求有一定的精确度。配制培养基所用容器和配套器具应洁净。对热敏感的培养基如糖发酵培养基其分装容器一般应预先进行灭菌,以保证培养基的无菌性。脱水型培养基应完全溶解于水中,再行分装与灭菌。配制时若需要加热助溶,应注意不要过度加热,以避免培养基颜色变深。如需要添加其它组分时,加入后应充分混匀。自配的培养基应标记名称、批号、配制日期等信息,并在已验证的条件下贮藏。

总之,配制培养基过程需要注意的很多,困扰很多实验人员的问题就是,自制培养基很难保证批次间的一致性。

最近遇到客户咨询……





没想到我们的正好解决了客户的痛点。客户之前做实验用的培养基都是自己配置,看这成份列表,配置起来还是非常麻烦的。不料能找到预混好的培养基,只需要加一支添加剂就可以了。

商品化的培养基成品,有符合规定且标准化的生产环境。工厂建立质量控制程序,以确保所用培养基质量符合相关检测的需要。培养基常规监控项目 pH,适用性检查试验,定期的稳定性检查以确定有效期。培养基产品涵盖食品、药品、水质监测、化妆品、乳制品、科研院所等等所有微生物检测相关行业

培养基自行制备和购买成品培养基,都是可行的,科研工作者可以按照各自的需要进行选择。

下面介绍一下模拟葡萄汁培养基在选择酵母菌生长特性和发酵香味中的应用。

在模拟葡萄汁培养基 q-以三种非酿酒酵母 (葡萄汁有孢汉逊酵母、美极梅奇酵母、浅白隐球酵母) 为买验对象,以酿酒酵母 DV10 为对照, 研究三种非酿酒酵母的生长特性和发酵香气。
实验方法
1. 生长曲线测定
1.1 酵母活化
在 YPDA 固体培养基上挑取非酿酒酵母菌株接种于 YPD 液体培养基中,于 28℃、170r/min 条件下培养 24 h 制成种子液。
1.2 生长曲线测定
将各酵母种子液以 1% 的接种量接种于 YPD 液体和 MSM 培养基中,28℃ 条件下培养, 每隔 2 h 取 200L 菌液于 96 孔板中,使用 BiotekSynergyHTX 多功能微孔板检测仪在 600nm 波长处测定菌悬液的 OD 值, 每个样品重复测定 3 次。然后根据时间和 OD 值绘制生长曲线。
2. 模拟葡萄汁发酵
将各非酿酒酵母种子液以 1% 的接种量接种于 MSM 培养基中, 并于 28℃ 培养 14d 得到酵酒样,每个样品设 3 个重复。
3. 挥发性化合物测定
酒样的挥发性化合物采用顶空固相微萃取一气质联用技术测定。香气化合物使用配带有 PAL 自动进样器的 7890B/ 5977A 气相色谱法质谱联用仪检测,选择 DB-WAX 毛细管色谱柱,顶空固相微萃取进样,20 mL 顶空瓶中加入 2 g 氯化钠,8 mL 样品以及 2OL 内标 (
4-甲基-2-戊醇,浓度2.000g/L),45℃ 预热顶空瓶 10 min, 萃取头萃取顶空瓶液面上方气体 45 min,萃取过程顶空瓶在 Agitator 中不停摇动, 萃取头在进样口 250℃ 解析 10 min,采用不分流模式进样, 恒流模式, 柱流量 0.8 mL/min,程序升温, 初始温度 40℃, 以 1~C/min 升到 45℃, 保持 2 min, 以 3℃/rain 升到 84℃, 保持 2 min,以 3℃/rain 升到 120℃, 保持 3 min, 以 3qC/min 升到 200℃, 以 5℃/min 升到 230℃, 运行时间 71.667rain,MSD 传输线 250℃,质谱选择 SCAN 模式进行扫描。
4. 挥发性化合物的分析
用 GC—MS 内置比色谱库 NISTI4 检索匹配,并结合保留指数定性,用内标法定量。



结论
本实验通过对葡萄汁有孢汉逊酵母、浅白隐球酵母和美极梅奇酵母这三株非酿酒酵母的生长特性和发酵香气进行比较分析,发现不同非酿酒酵母之间的生长能力和产生的发酵香气有显著区别。香气物质总含量由高到低为美极梅奇酵母 (206.27 mg/L)、葡萄汁有孢汉逊酵母 (141.64 mg/L)、浅白隐球酵母 (137.78me,/L)、DVIO(123.81me,/L)。美极梅奇酵母的适应能力较好,在发酵前期比较活跃,但一般很难独立完成发酵,必须与酿酒酵母相结合使用。浅白隐球酵母的生长和适应能力较差,一般在发酵中后期发挥作用,也必须与酿酒酵母相结合使用。葡萄汁有孢汉逊酵母在具有良好生长和适应能力的同时,产生的香气物质种类最多。